Получение гетерологичных продуцентов рамнолипидов на основе Acetobacter aceti AlC1824
М.Н. Барамзин, С.Г. Литвинец
Раздел: Химия природных сред и объектов
Рамнолипиды солюбилизируют нефтяные загрязнения почв, делая их более доступными для разложения почвенными микроорганизмами. В отличие от химических поверхностно-активных веществ, рамнолипиды безопасны для окружающей среды. Целью данной работы является получение гетерологичных продуцентов рамнолипидов на основе Acetobacter aceti AlC1824 с использованием искусственного промотора и оптимизация условий культивирования продуцента. Данный путь позволит избежать использования в качестве продуцента рамнолипидов условнопатогенного вида Pseudomonas aeruginosa, который может быть применён для биоремедиации почв. Кластер генов rhlAB амплифицировали из генома Pseudomonas aeruginosa B-6643 путём полимеразной цепной реакции. В p-AlT2 вектор встроили конструкцию, состоящую из кластера генов rhlAB и искусственного промотора. Путём кальциевой трансформации вставку ввели в клетки Acetobacter aceti AlC1824. С помощью колориметрической системы отбора рекомбинантных клонов – бело-голубой селекции отобрали 20 трансформантов. Обнаружили целевую вставку при помощи полимеразной цепной реакции у 7 трансформантов. В ходе индикаторного теста характерный осадок обнаружен у двух трансформантов: А4 и А8. Установлены подходящие для культивирования трансформантов источники азота (пептон) и углерода (маннитол). Определён ряд параметров: оптимальное значение кислотности среды – pH 5, оптимальное значение температуры культивирования у трансформанта А4 – 30 оС, у трансформанта А8 – 25 оС. Количество образуемых в оптимальных условиях рамнолипидов составило для А4 – 139,3±20,1 мг/мл, для А8 – 13,0±1,0 мг/мл. Экспериментально показана высокая отмывающая способность в отношении сырой нефти рамнолипидов гетерологичных продуцентов: А4 – 93,9±1,5% и А8 – 96,7±1,5%.
ISSN 1995-4301
Выбор параметров просмотра
